溶菌酶检测试盒说明书

一、测定原理：
在一定浓度的混浊菌液中，由于溶菌酶能水解细菌细胞壁上肽聚糖使细菌裂解而浓度降低，透光度增强，故可以根据透光度变化来推测溶菌酶的含量。

二、试剂组成及配制 (30T/28样)
1、试剂组成：
试剂一：菌粉，5mg×4支，2～8℃干燥保存，有效期6个月。
试剂二：菌粉溶剂，100ml×1瓶，2～8℃保存，并每月放微波炉中温消毒20秒，有效期6个月。
试剂三：标准品，粉剂2mg×1支（活力为8万单位/mg），2～8℃干燥保存，有效期6个月。
[注]：试剂盒严格按照上述方法保存有效期可延至一年。
2、试剂配制：
（1）、贮备菌液的配制：
取5mg/支的菌粉1支，倒入匀浆管中，加菌粉溶剂1ml，轻轻缓慢上下旋转研磨3分钟（切勿溅出），即为贮备菌液，将其取出后置2～8℃冰箱密封保存一周左右。
（2）、应用菌液的配制：
按贮备菌液:菌粉溶剂=1:19进行配制，需多少配多少。剩下的应用菌液2～8℃可保存一周左右。是现用现配，用时摇匀。
（3）、标准品的配制：
①、标准品贮备液的配制：
每支准确加双蒸水1.0ml配成2mg/ml的标准品贮备液。2～8℃可保存7～10天。
②、标准品应用液的配制：
临用时按标准品贮备液∶双蒸水=1∶799比例稀释成2.5μg/ml（即200U/ml）的标准品应用液，需多少配多少。2～8℃保存，可保存7～10天。
附录Ⅰ：自身对照法测定溶菌酶
（适用于样本数量较少，或者样本有混浊或有颜色，如血液红色）
[注]：本法用分光光度计530nm处,1cm光径比色皿测得是样本或标准的透光度值

1、操作步骤
①、将配制好的应用菌液，标准应用液及所需检测的样本均放入37℃水浴箱中预温5分钟
以上。使菌液，标准液及检测样本的温度达到37℃。
②、将可见分光光度计于530nm处,1cm光径比色皿,以双蒸水调透光度100% (比色皿准备两只,一只用于调透光度100%,一只用于测定)。
③、往相应编号的试管中加入0.2ml待测样本，取2ml应用菌液迅速冲入试管中，立即混匀并计时。(标准品应用液取0.2ml双蒸水,加入2ml应用菌液,其它操作与测定相同)
④、迅速倒入比色皿中在可见分光光度计530nm处比浊，5秒时读取透光度值T0, 比色皿不要取出，在2 分5秒时读取透光度值T2；
[注]：如5秒时来不及读数，可20秒时读取调透光度值T0,在2 分20秒时读取透光度值T2，标准管需同样操作。
⑤、求出2次透光度的差值（△T= T2-T0）。
[注]：用同一比色皿每检测一个样本后均要用双蒸水冲洗干净，才可再放第二个样本或标准品应用液。