潮霉素B液体和干粉原来是这样操作！

潮霉素B液体和干粉原来是这样操作！

潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核（如细菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳动物真核细胞。

液体：无菌的潮霉素B溶液（100mg/ml），可直接用培养液稀释使用。

干粉：本品是潮霉素B干粉，用于细胞培养实验溶解后过滤除菌。溶剂水，PBS溶液。

常用筛选浓度

注意：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，使用浓度为50-1000μg/mL。对于次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定*筛选浓度。

一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

稳定转染细胞的筛选

1）     转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。

注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，将细胞稀释至丰度不超过25%。

2） 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。

3）  筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。

4） 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。

5） 之后更换正常培养基培养即可。

注意事项

1） 潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了来自E. Coli.之外，还发现于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

2） 本品为有毒化合物，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。

3） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。