土壤硝酸还原酶（S-NR）试剂盒操作原来这么方便！

土壤硝酸还原酶(S-NR)试剂盒操作原来这么方便！

硝酸还原酶是一种氧化还原酶，可催化硝酸离子还原成亚硝酸离子的反应。
硝酸还原酶位于细胞质内或细胞膜外，在硝酸盐还原途径中是限速因子，通过 NADH和 NADPH 其中之一或两者( 双功能) 提供两个电子催化反应，使硝酸盐转换成亚硝酸盐。

硝酸还原酶是同源二聚体，每个亚基分子质量约100～110kDa，包含三个功能区，从N-末端到C-末端分别是:钼辅酶MoCo(硝酸盐结合与降解区域)，血红素-Fe(细胞色素b5结合域)和FAD(黄素腺苷酸二核苷酸磷酸、细胞色素b还原酶、NADH或NADPH结合域)。这三个区域是氧化还原中心，催化电子从NADP或NADPH转移到硝酸盐上。这三个结构和功能域通过hingeⅠ和hingeⅡ两个铰链连接起来。

植物体内，hingeⅠ连接细胞色素b5结合域和钼辅酶/二聚化区域，它包含一个保守的磷酸化丝氨酸残基，被具有调控作用的14-3-3二聚体识别，在植物、真菌和哺乳动物细胞中这个二聚体来自一个高度保守的基因家族。在二价阳离子存在的情况下，hingeⅠ把硝酸还原酶转换成*无活性的复合体，使之不能行使从NADPH到硝酸盐之间的电子转移，从而抑制酶的活性。

产品说明：

S-NR 催化土壤中硝酸盐还原为亚硝酸盐，是土壤硝态氮还原的关键酶。研究S-NR 的活性对合理施肥，降低氮素的损失具有重要意义。
S-NR 催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO3ˉ +NADH+H＋→ NO2ˉ +NAD＋+H2O；产生的亚硝酸盐
能够在酸性条件下，与对–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成红色偶氮化合物；未反应的NADH会抑
制后续的显色反应，用PMS将其中和后再进行后续反应；生成的红色偶氮化合物在 520 nm 有大
吸收峰，可用分光光度法测定。

自备实验用品及仪器：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量比色皿/96孔板、冰和蒸馏水。

活性计算：

1、标准曲线绘制：
以 0.8、0.6、0.4、0.2、0.1μmol/mL 标准溶液为横坐标，ΔA 标准为纵坐标绘制标准曲线，得到
线性回归方程 y=kx+b，将ΔA 测定代入方程得到 x（μmol/mL）；

2、S-NR 活性计算
单位的定义：24h 每 g 土样中产生 1μmol NO2ˉ的量为一个 S-NR 活力单位。
S-NR（U/g）=x×V 标准÷W÷T
=24×x
V 标准：反应体系中加入的标准液体积，0.1mL；W：样本鲜重，0.1g；T：反应时间，1/24h。

注意事项：

1、试剂一、试剂二和试剂四在冰上放置，用完立即放回-20℃。

2、每个测定管设一个对照管。

3、ΔA 测定过小（小于 0.01），可延长反应时间（37℃水浴时间）。