AP标记的兔抗狗IgG

AP标记的兔抗狗IgG

碱性磷酸酶（AP）用于标记抗体，常用戊二醛一步法，将酶和单抗混合，再加入适量戊二醛，使酶和抗体蛋白的NH2分别与两个醛基结合，制备成结合物。该法简便，但所得产物不均一，抗体活性损失大，酶标记率低。其程序如下：

1. 将5mg AP加入1ml抗体溶液（2mg/ml）中溶解，装入透析袋，于4℃对0.01mol/L PH7.2 PBS透析18小时，换液三次。

2. 加入2.5%戊二醛20ul，室温作用1-2小时，4℃对PBS透析过夜，其间换液三次。

3. 换用0.05mol/L PH8.0 Tris-HCl缓冲液透析，4℃过夜，换液三次。

4. 取出标记抗体，用含1%BSA的Tris-HCl缓冲液稀释至4ml，即为AP标记物原液。

5. 每毫升中加入0.4ml甘油，小量分装，保存备用。

实验室操作注意事项：

1.实验时根据试验的情况和性质进行必要的防护。根据试验可能发生的危险事故佩戴必要的防护工具，例如穿好试验服，戴橡胶手套，防护面具，防毒面具等。实验前，要注意清理试验场周围的安全隐患。检查试验装置、药品和相关物品是否有不符合要求的情况等。

2.遵循化学药品的性质和化学反应的规律，不盲目蛮干和主观臆测化学反应的过程。应根据化学反应的性质和过程选择匹配的反应装置，不可图省事省去必要的安全措施。

3.经常估计到实验的危险性

实验事故虽不可预测，但其危险性的大小是可以估计到的。即使对不大了解的实验，也必须推测其危险程度而制订相应的预防措施。象下面这类实验，必须十分注意。

①不了解的反应及操作;

②存在多种危险性的实验(如发生火灾、毒气等);

③在严酷的反应条件(如高温、高压等)下进行的实验。

4.充分作好发生事故时的预防措施并加以检查。

平时注意熟悉需要关闭的主要龙头、电气开关，灭火器的位置及操作方法，避免发生事故时才四处寻找应急的物品。

5.实验的后处理。实验的后处理工作，亦属实验过程的组成部份。特别不可忽略回收溶剂和废液、废弃物等的处理。

AP标记的兔抗狗IgG