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【样本要求】
样本类型和采集
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠氮钠做为防腐剂。
1、细胞培养上清:4000rpm 条件下离心 20min,去除细胞颗粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反复冻融。
2、血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,4000rpm 条件下离心 20min,小心地分离出血清,保存在- 20℃以下,避免反复冻融。
3、血浆:肝素,EDTA,或柠檬酸钠作为抗凝剂。在 4000rpm条件下,离心 20 分钟取上清,血浆保存在-20℃以下,避免反复冻融。
4、组织:用预冷的 PBS (0.01 M,pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 PBS(一般按 1: 9 的重量体积比,比如 1g 的组织样品对应 9 mL 的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在 PBS 中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。最后将匀浆液 5000×g 离心 5-10 分钟,取上清
检测。