糖原含量试剂盒说明书

糖原含量试剂盒说明书

测定意义：
糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖，是糖的主要的储存形式之一，主要贮存在肝和肌肉
中作为备用能量，分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调节血糖浓度，当血糖升高时可在肝
脏合成糖原，血糖降低时，肝糖原则分解为葡萄糖以补充血糖。因此，肝糖原对维持血糖的
相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的储存形式,在剧烈运动消耗大量血糖时，肌糖原不
能直接分解成血糖，必须先分解产生乳酸,随血液循环到肝脏,通过糖异生转变为肝糖原或葡
萄糖。

测定原理：
蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原，在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、浓硫酸（不允许快递）和蒸
馏水。

试剂的组成和配制：
提取液：液体50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：0.1mg/mL 的葡萄糖标准液 10mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶， 4℃保存；

糖原提取：
1﹑细胞或细菌：收集500~1000 万细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；加入0.75mL 提
取液超声波破碎细菌或细胞（功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；转移至
10mL 试管中，95℃水浴20min（盖紧，防止水分散失），隔5min 振摇试管1 次，使充分混
匀；取出试管冷却后，用蒸馏水定容到5ml，混匀，8000g 25℃离心10min，取上清液待测。
2﹑组织：称取0.1~0.2g 样品，加入0.75ml 提取液充分匀浆；转移至10ml 试管中；95℃水
浴20min（盖紧，防止水分散失），隔5min 振摇试管1 次，使充分混匀；待组织全部溶解后，
取出试管冷却后，用蒸馏水定容到5ml，混匀，8000g 25℃离心10min，取上清液待测。

步骤和加样表
1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至95℃。
3、试剂二工作液的配制：在试剂二中倒入10mL 蒸馏水，缓慢倒入40mL 浓硫酸，充分溶
解混匀后使用；用不完的试剂4℃保存一周；
4、加样表（在EP 管中反应）：
试剂（μL） 空白管 标准管 测定管
糖原提取液 250
试剂一 250
蒸馏水 250
试剂二 1000 1000 1000
混匀，95℃水浴10min（盖紧，防止水分散失），冷却，于620nm 波长处，以蒸馏水调零，
分别读取空白管、标准管和测定管吸光度，分别记为A1、A2 和A3。