异柠檬酸裂解酶（ICL）试剂盒说明书

异柠檬酸裂解酶（ICL）试剂盒说明书

产品内容：
提取液：液体50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体15mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体15mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×3 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入5mL 蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试
剂仍-20℃保存；
试剂四：粉剂×3 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入5mL 蒸馏水，充分混匀待用；现配现用；
试剂五：液体×2 支，4℃保存；临用前每支加入560μL 蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试
剂仍4℃保存；
试剂六：粉剂×3 瓶，4℃保存；临用前每瓶加入5mL 蒸馏水，充分混匀待用。用不完的试剂
-20℃保存；

产品说明：
ICL（EC4.1.3.1）主要存在于植物和微生物中，油料作物种子在萌发过程中，通过乙醛酸循环
及其他过程将脂肪转变成碳水化合物。ICL 是乙醛酸循环的关键酶之一。
ICL 催化异柠檬酸降解为乙醛酸和琥珀酸，乙醛酸和NADH 在LDH 的作用下生成乙醇和
NAD，NADH 在340nm 下有特征吸收峰，监测340nm 吸光度的减小速率可间接反应ICL 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
操作步骤：
一、样本的前处理：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10 4 个）：
提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波
破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；15000g 4℃离心
10mi n，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL
提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。