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信帆生物-明胶酶谱法检测试剂盒2026现货更新

发布时间: 2026-05-26  点击次数: 13次

检测原理:

本方法借助 SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳联合凝胶染色技术,能够同步检测 MMP-2、MMP-9 活性以及无活性前体酶原谱系,检测灵敏度可达nM级别,检测性能优于 ELISA 检测方式。

实验预先制备混合明胶底物的电泳凝胶,将待测生物样本加入凝胶体系完成电泳分离。电泳体系内的SDS可与基质金属蛋白酶可逆结合,破坏蛋白空间构象,暂时抑制酶的水解活性,保障蛋白依据分子量差异完成有效分离。电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer孵育,MMP恢复活性,凝胶中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶条带的位置,蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮区域,从而能同时指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。

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检测目的:

本试剂盒主要用于检测相关的组织、细胞中MMP-2、MMP-9 酶谱活性。

本试剂盒可进行50 次标准胶检测,如果每块胶加样孔可以10个以上,总体可以检测500个样本以上。


图形示例和说明:(仅供参考,具体以实际条带为准)

如下图1,该酶谱图可依据分子量标注 MMP 活性透明条带分布,由于检测样品未做还原、高温变性处理,条带实际迁移位置和理论分子量数值并不准确对应。正常血浆阳性样本能观察到反衬透亮条带,分别对应 66kDa(MMP-2)、72kDa (MMP-2前体)、87kDa(MMP-9) 以及 92kDa (MMP-9前体)。血浆里活化形式的 66kDa MMP-2 含量稀少,加大上样浓度后,可在前体 MMP-2 条带下方见到浅淡条带,对应图中最右侧泳道。

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注意事项:

1. 组织或细胞的蛋白样品制备可用常规的方法,但需注意蛋白裂解液中不能加入EDTA,因为EDTA是金属离子螯合剂,可以络合Zn2+,抑制MMP的活性;也不能加入β-巯基乙醇或DTT,因为会导致蛋白的二硫键被打开,蛋白不能复性。

2. 考马斯亮蓝染色液含有醇类物质,呈酸性,具有轻微腐蚀性,请穿戴好实验服和一次性实验手套,不要直接接触。严禁入口。使用完成后,请密封保存

3. 凝胶干燥可使用聚丙烯酰胺凝胶干胶装置室温快速干燥凝胶,可以长时间的保存。

4. 凝胶染色之后,考马斯亮蓝染色液可以回收利用,装入新容器内,4ºC保存,可反复使用2-3次。

5. 本试剂盒仅供科研实验使用,不得用于食用、临床医疗等其它用途。

6.实验操作中,请穿戴好实验服、防护口罩和一次性实验手套,严禁直接接触试剂。严禁入口。

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