信帆生物明胶酶谱法分析试剂盒发表的文献！

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描述：基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以无活性的酶原形式分泌，活化后能够降解 细胞外基质的胶原蛋白，又称胶原酶。通过影响细胞外基质，胶原酶参与胚胎发育、形态发生、组 织重塑等过程，并参与炎症、肿瘤、心血管、神经等许多疾病过程。血浆与组织中的 MMP-2、MMP-9 参与各种生理与病理过程，其在诊断和治疗中的意义日益受到重视  。

 

本试剂盒采用酶谱法(zymography)检测 MMP-2、MMP-9  活性。Zymography  是一种广为使用的、基 于 SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达 1 nM，高于 ELISA 方法 2，其 基 本原理和程序是：制备加有胶原酶底物的 SDS-PAGE 凝胶，含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电 泳， 电泳结束后取出凝胶与酶反应 Buffer 孵育，凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深 染，形 成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色 而形成透 亮区域，从而能同时指示 MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9 特异蛋白底物及酶学反应缓冲液，可检测少至 0.1~0.5 µl 血液中的 MMP-2、MMP- 9 酶谱及活性，检 测灵敏度~1 nM。试剂盒可进行 50 次标准小胶检测，如果小胶加样孔为 10~15个，则总计可检测 500~750 个样品。


明胶酶谱分析试剂盒发表的文献：

《绿茶多酚EGCG增强动脉粥样硬化斑块稳定性及其相关机制研究》

 部分绿茶多酚EGCG增强高脂饮食喂养ApoE缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性目的:急性冠脉综合征(Acute coronary syndrome,ACS)是指一系列严重的急性心肌缺血性疾病,主要包括不稳定型心绞痛以及急性ST段抬高或非ST段抬高型心肌梗死。目前大量研究资料已证实,急性冠脉综合征发病的主要病理生理基础是冠状动脉中不稳定型动脉粥样硬化斑块的破裂,引起冠状动脉内急性血栓形成,继而引起心肌严重的缺血、缺氧。近年来,多项流行病学研究报道称,饮用绿茶可以明显降低冠心病的发病率。绿茶的抗动脉粥样硬化作用主要原因是绿茶中含有大量的多酚类化合物,其中含量多的为儿茶素。

绿茶中儿茶素主要成分包括表儿茶素(EC),表儿茶素没食子酸酯(ECG),表没食子儿茶素(EGC)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)。在这些成分中,以EGCG含量丰富,活性zui强,已被证明具有多种药理学作用和生物学特性。我们进行本研究主要目的就是为了证实绿茶多酚EGCG是否能够增强高脂饮食喂养ApoE缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性并探讨其可能的相关机制。方法:30只雄性ApoE缺陷小鼠(6周龄,体重18-20g)被随机分为对照组(n=15)以及EGCG组(n=15)这些小鼠均使用含有21%脂肪以及0.15%胆固醇的高脂饮食喂养。

EGCG组以及对照组分别给予EGCG(10mg)或者同等剂量的0.9%生理盐水进行腹腔注射共16周。随后麻醉处死小鼠,取小鼠头臂干动脉并予固定石蜡包埋。小鼠头臂干横切面进行HE染色以及Masson染色分别评估动脉粥样硬化斑块形态以及胶原含量。此外,使用免疫组织化学染色的方法分析小鼠斑块中巨噬细胞以及平滑肌细胞成分的比例。蛋白质印迹法(Western blot)用来检测斑块中蛋白表达水平,明胶酶谱法用来检测斑块中基质金属蛋白酶的活性。

后,我们用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清炎症因子单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及干扰素-γ(IFN-γ)水平。

结果:高脂饮食喂养16周后,ApoE缺陷小鼠头臂干动脉近端横切面HE染色可见明显的动脉粥样硬化斑块形成,提示造模成功。另外,与对照组相比,EGCG组ApoE缺陷头臂干动脉近端粥样硬化病变程度明显减轻。Masson染色结果提示,EGCG干预后动脉粥样硬化斑块中胶原成分明显增加。免疫组织化学染色发现EGCG组斑块中巨噬细胞比例明显降低,而斑块中平滑肌成分显著增高。

此外,Western blot检测发现EGCG可以显著降低ApoE缺陷小鼠斑块中基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)的表达。同样,明胶酶谱法结果提示EGCG组斑块中MMP-2和-9活性较对照组明显减低。后,与对照组相比,EGCG腹腔注射后,ApoE缺陷小鼠血清炎症因子MCP-1、IL-6、TNF-α以及IFN-γ水平显著降低。

结论:本研究结果提示,绿茶多酚EGCG能够增强高脂饮食喂养ApoE缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性。此外,EGCG增强斑块稳定性的内在机制可能与其抑制多种炎症因子、基质金属蛋白酶诱导因子以及机制金属蛋白酶表达有关。 

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