质粒小量提取试剂盒*！

质粒小量提取试剂盒*！

50T/100T 常温保存，复检期一年。

产品说明：

本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的 DNA 的原理特异性提取质粒 DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料能、专一地吸附 DNA，可 大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。使用本试剂盒提取的质粒 DNA 可适用于各种常规 操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。溶液Ⅰ在使用前先加入 RNaseA（将试剂盒中提供的 RNaseA 全部加入），混匀，置于 2-8℃保存。如非指明，所有离心 步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 

操作步骤：

1、取 1-5ml 细菌培养物，12000rpm 离心 1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌 体沉淀收集到一个离心管中）。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入 250ul 溶液Ⅰ(请先检查是否已加入 RNaseA），使用移液器或旋 涡振荡器*悬浮细菌细胞沉淀。注意：如果菌块未*混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度 偏低。

3、向离心管中加入 250ul 溶液Ⅱ，温和地上下翻转 6-8 次使菌体充分裂解。注意：混匀一定要温和， 以免污染细菌基因组 DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过 5 min，以免质粒受到破 坏。

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4、向离心管中加入 350ul 溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转 6-8 次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉 淀。12000rpm 离心 10 min，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出 沉淀。注意：溶液Ⅲ加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再 Solarbio 第 2 页 共 2 页 次离心后取上清。

5、将上一步所得上清液加入吸附柱中（吸附柱加入收集管中），室温放置 2min，12000rpm 离心 1min， 倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

6、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm 离心 1min，弃 废液，将吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入 500ul 漂洗液，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

8、12000rpm 离心 2min，将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余 的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。

9、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液， 室温放置 2min，12000rpm 离心 1min。

10、为了增加质粒的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中，室温放置 2min，12000rpm 离心 1min。

注意事项：

1、使用前请先检查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出现混浊，如有混浊现象，可在 37℃水浴中加热几分钟， 待溶液恢复澄清后再使用。溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后应立即拧紧盖子。

2、洗脱缓冲液体积不应少于 50ul，体积过小影响回收效率;洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影晌， 若需要用水做洗脱液应保证其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 将水的 pH 值调至此范围)，pH 值低于 7. 0 会降低洗脱效率，DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。

3、 如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10kb 的大质粒，应加大菌体使用量，使用 5-10ml 过夜培养 物，同时按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增 加提取效率。

4、DNA 浓度及纯度检测：得到的质粒 DNA 纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有 关。得到的 DNA 可用琼脂糖疑胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 DNA 应在 OD260 处有 显著吸收峰，OD260 值为 1 相当于大约 50ug/ml 双链 DNA、 40ug/ml 单链 DNA  OD260/OD280比值 应为 1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为 pH 值和离子存 在会影响吸光值，但并不表示纯度低。

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