细菌蛋白提取试剂盒现货供应

细菌蛋白提取试剂盒现货供应

Bacterial Protein Extraction Kit 
包装规格：10 Assays /50 Assays 
产品简介：
细菌蛋白提取试剂盒能够从细菌细胞中提取生物活性可溶性蛋白质和高纯度包涵体。能够与FLAG，poly-His和GST融合
蛋白亲和层析纯化系统兼容，还能与许多酶，蛋白质和蛋白酶抑制剂混合物兼容。该试剂盒能够满足1升细胞培养物（OD 600 
= 1）或10X 100~200 mg湿重的大肠杆菌的提取实验。
组成：
组成 600596 600596 
10X Cell lysis buffer 5 ml 25 ml 
DNase/RNase 200 μl 1 ml 
Lysozyme 1 ml 5 ml 
PMSF 500 μl 2500 μl 
2X SDS gel-loading buffer 0.2 ml 1 ml 
保存条件：
常温运输，DNase/ RNAse，Lysozyme，2X SDS gel-loading buffer 和 PMSF 在-20°C 保存，其他产品在室温下保存，保质
期 24 个月。
提取步骤：
1. 5000 xg离心10 min来收集表达目的蛋白的细胞。弃掉上清并用PBS冲洗沉淀。将细胞沉淀每100 ml细胞培养物（OD600 
= 1时）重悬于4 ml的1X细胞裂解缓冲液中。
2. 加入40 μl PMSF和80 μl溶菌酶，37℃孵育细胞悬浮液30 min。
3. 将混合物放在摇床上孵育10 min。
4. 加入20 ul DNaseI / RNase，37°C下继续在摇床上孵育10 min。
5. 4°C下3,000 g离心30 min，去除不溶物。将细胞裂解液收集到干净的试管中。
6. 通过10%SDS-PAGE电泳实验，上样量20 μl来分析提取物。将含有目的蛋白的组分保存在-70°C或直接通过纯化柱纯化。

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Notes 
1. 可以加入蛋白酶抑制剂，但使用Ni2+亲和柱纯化时不能添加EDTA或其他螯合剂，因为螯合剂会破坏Ni柱与组氨酸标签
的结合。
2. 上清液可能需要通过0.45 μm的过滤器，以防止后续纯化过程中树脂堵塞。
3. 细菌细胞也可以通过超声处理（3×10秒）来溶解某些蛋白质，但是在超声处理过程中需要保持低温。
4. 在进行蛋白提取后尽快使用提取的蛋白质。
5. 溶于异丙醇的PMSF应保存在-20°C。

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