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高迁移率族蛋白1(HMG-1检测试剂盒太好用啦

发布时间: 2017-09-14  点击次数: 917次

高迁移率族蛋白1(HMG-1检测试剂盒简介

高迁移率族蛋白于1973年在牛胸腺中被提取和鉴定,因其在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的高迁移能力而得名。具体可参见Ferrari S, Finelli P, Rocchi M, Bianchi ME (July 1996). "The active gene that encodes human high mobility group 1 protein (HMG1) contains introns and maps to chromosome 13". Genomics 35 (2): 367–71. doi:10.1006/ge996.0369. PMID8661151.。根据分子质量大小、序列相似性和DNA结构特性,HMG可进一步分为HMGA、HMGB、HMGN 3个家族。而HMGB家族又有3个成员,即HMGB1、HMGB2和HMGB3,三者在氨基酸序列上有80%的一致性。HMGB1是含量zui丰富的HMG蛋白,在典型的哺乳动物细胞内约有106个分子,平均10~15个核小体即可含有1个HMGB1分子。HMGB1广泛分布于淋巴组织、脑、肝、肺、心、脾、肾等组织中,HMGB1除在肝、脑组织中主要存在于胞浆外,在大多数组织中存在于胞核;而HMGB2/3分布较局限,HMGB2仅分布在睾丸和淋巴组织中,HMGB3仅在胚胎中被发现,二者可能与胚胎发育有关。HMGB1先前也称HMG1,在进化过程中其氨基酸序列高度保守,啮齿类动物与人的氨基酸序列同源性高达98%以上,小鼠与大鼠氨基酸序列同源性更是高达100%。

高迁移率族蛋白1(HMG-1检测试剂盒操作方法

1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。

2、加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。

3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。

4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。

5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml

6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

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